Protein A /G/ L介绍和抗体纯化示例
案例展示1：AT ProteinA Sanarose 4FF耐碱性测试
♦ 材料与方法：
填料批号：AT ProteinA Sanarose 4FF 批号20230331;
测试载量样品：人IgG;
层析柱：1mL预装柱;
♦ 缓冲液
清洗液：0.5M NaOH;
缓冲液A：20mM 磷酸二氢钠，150mM NaCl，pH7.4;
缓冲液B：0.1 M 柠檬酸钠，pH3.0;
中和缓冲液：1M Tris-Cl，pH9.0
♦ 程序运行
0.5M NaOH，15CV，1mL/min
↓
水洗，10CV，1mL/min
↓
缓冲液A平衡，10CV，1mL/min
↓
缓冲液B洗脱，10CV，1mL/min
分别在循环0、10、20、30、40、50、65、75、105、155、197、212、242、250次后测定动态载量;
♦ 实验结论
如下图所示，用0.5 M NaOH在线清洗层析介质AT ProteinA Sanarose 4FF，单次清洗接触时间15min，250次循环后(清洗时间3750min，62.5hr)剩余结合载量为初始载量的89%。通过本实验，说明AT ProteinA Sanarose 4FF具有较强的耐碱能力，对于大规模纯化中层析介质的清洁至关重要。
图3 AT ProteinA Sanarose 4FF 0.5M NaOH清洗次数与载量变化关系
案例展示2：利用AT ProteinA Sanarose 4FF纯化小鼠血清
♦ 物料信息
样品信息：2mL 小鼠腹水(鼠源 IgG);
填料批号：AT ProteinA Sanarose 4FF 批号20230331;
层析柱：1mL预装柱;
♦ 缓冲体系
平衡液：1*PBS，pH7.4;
洗脱液：10mM NaAc-HAc，pH3.5;
中和液：1M Tris，pH9.0;
♦ 程序运行
缓冲液A平衡，10CV，1mL/min
↓
上样，0.2 mL/min
↓
缓冲液A平衡，10CV，1mL/min
↓
缓冲液B洗脱，10CV，1mL/min，收集目的蛋白
↓
SDS-PAGE纯化结果检测
♦ SDS-PAGE纯化结果检测
图4 AT ProteinA Sanarose 4FF纯化小鼠血清
结论：从纯化结果上看，AT Protein A Sanarose 4FF 纯化效果优于竞品(LXPA)。
